Proteinat DELLA janë master të konservuararregullatorët e rritjesqë luajnë një rol qendror në kontrollin e zhvillimit të bimëve në përgjigje të sinjaleve të brendshme dhe mjedisore. DELLA vepron si një rregullator transkriptimi dhe rekrutohet për të synuar nxitësit duke u lidhur me faktorët e transkriptimit (TF) dhe histonin H2A përmes domenit të tij GRAS. Studimet e fundit kanë treguar se stabiliteti i DELLA-s rregullohet në mënyrë post-përkthimore përmes dy mekanizmave: poliubikuitinimi i shkaktuar nga fitohormon giberelinë, i cili çon në degradimin e tij të shpejtë, dhe konjugimin e modifikuesve të vegjël të ngjashëm me ubiquitin (SUMO) për të rritur akumulimin e tij. Veç kësaj, aktiviteti i DELLA-s rregullohet në mënyrë dinamike nga dy glikozilime të ndryshme: ndërveprimi DELLA-TF përmirësohet nga O-fukosilimi, por frenohet nga modifikimi i N-acetilglukozaminës së lidhur me O (O-GlcNAc). Megjithatë, roli i fosforilimit të DELLA mbetet i paqartë, pasi studimet e mëparshme kanë treguar rezultate kontradiktore, duke filluar nga ato që tregojnë se fosforilimi nxit ose redukton degradimin e DELLA-s e deri tek të tjerat që tregojnë se fosforilimi nuk ndikon në stabilitetin e saj. Këtu, ne identifikojmë vendet e fosforilimit në REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) i pastruar nga Arabidopsis thaliana me anë të analizës së spektrometrisë së masës dhe tregon se fosforilimi i dy peptideve RGA në rajonet PolyS dhe PolyS/T promovon lidhjen e H2A dhe rritjen e aktivitetit RGA. Lidhja e RGA me promovuesit e synuar. Veçanërisht, fosforilimi nuk ndikon në ndërveprimet RGA-TF ose stabilitetin RGA. Studimi ynë zbulon mekanizmin molekular me të cilin fosforilimi nxit aktivitetin e DELLA.
Për të sqaruar rolin e fosforilimit në rregullimin e funksionit DELLA, është thelbësore të identifikohen vendet e fosforilimit të DELLA in vivo dhe të kryhen analiza funksionale në bimë. Me pastrimin e afinitetit të ekstrakteve bimore të ndjekur nga analiza MS/MS, ne identifikuam disa fosfozite në RGA. Në kushtet e mungesës së GA, fosforilimi i RHA rritet, por fosforilimi nuk ndikon në stabilitetin e tij. Më e rëndësishmja, analizat e co-IP dhe ChIP-qPCR zbuluan se fosforilimi në rajonin PolyS/T të RGA promovon ndërveprimin e tij me H2A dhe lidhjen e tij me nxitësit e synuar, duke zbuluar mekanizmin me të cilin fosforilimi nxit funksionin e RGA.
RGA është rekrutuar për të synuar kromatinën përmes ndërveprimit të nëndomainit LHR1 me TF dhe më pas lidhet me H2A përmes rajonit të tij PolyS/T dhe nënfushës PFYRE, duke formuar kompleksin H2A-RGA-TF për të stabilizuar RGA. Fosforilimi i Pep 2 në rajonin PolyS/T midis domenit DELLA dhe domenit GRAS nga një kinazë e paidentifikuar rrit lidhjen RGA-H2A. Proteina mutant rgam2A shfuqizon fosforilimin RGA dhe adopton një konformacion të ndryshëm proteinash për të ndërhyrë në lidhjen H2A. Kjo rezulton në destabilizimin e ndërveprimeve kalimtare TF-rgam2A dhe shkëputjen e rgam2A nga kromatina e synuar. Kjo figurë përshkruan vetëm shtypjen transkriptuese të ndërmjetësuar nga RGA. Një model i ngjashëm mund të përshkruhet për aktivizimin transkriptues të ndërmjetësuar nga RGA, përveç se kompleksi H2A-RGA-TF do të nxiste transkriptimin e gjenit të synuar dhe defosforilimi i rgam2A do të ulte transkriptimin. Figura e modifikuar nga Huang et al.21.
Të gjitha të dhënat sasiore u analizuan statistikisht duke përdorur Excel, dhe dallimet e rëndësishme u përcaktuan duke përdorur testin Student t. Asnjë metodë statistikore nuk u përdor për të përcaktuar paraprakisht madhësinë e kampionit. Asnjë e dhënë nuk u përjashtua nga analiza; eksperimenti nuk ishte i rastësishëm; kërkuesit nuk ishin të verbër ndaj shpërndarjes së të dhënave gjatë eksperimentit dhe vlerësimit të rezultateve. Madhësia e kampionit tregohet në legjendën e figurës dhe skedarin e të dhënave burimore.
Për më shumë informacion rreth dizajnit të studimit, shihni Abstraktin e Raportit të Portofolit Natyror të lidhur me këtë artikull.
Të dhënat e proteomikës së spektrometrisë masive janë kontribuar në konsorciumin ProteomeXchange përmes depove partnere PRIDE66 me identifikuesin e të dhënave PXD046004. Të gjitha të dhënat e tjera të marra gjatë këtij studimi janë paraqitur në skedarët e informacionit plotësues, skedarët e të dhënave plotësuese dhe skedarët e të dhënave të papërpunuara. Të dhënat burimore janë dhënë për këtë artikull.
Koha e postimit: Nëntor-08-2024