Proteinat DELLA janë të ruajtura masterrregullatorët e rritjesqë luajnë një rol qendror në kontrollin e zhvillimit të bimëve në përgjigje të sinjaleve të brendshme dhe mjedisore. DELLA vepron si një rregullator transkriptimi dhe rekrutohet për të synuar promotorët duke u lidhur me faktorët e transkriptimit (TF) dhe histonin H2A përmes domenit të saj GRAS. Studimet e fundit kanë treguar se stabiliteti i DELLA-s rregullohet pas-përkthimit përmes dy mekanizmave: poliubikuitinimi i induktuar nga fitohormoni giberelinë, i cili çon në degradimin e tij të shpejtë, dhe konjugimi i modifikuesve të vegjël të ngjashëm me ubikuitinën (SUMO) për të rritur akumulimin e tij. Përveç kësaj, aktiviteti i DELLA-s rregullohet dinamikisht nga dy glikozilime të ndryshme: bashkëveprimi DELLA-TF përmirësohet nga O-fukozilimi, por frenohet nga modifikimi i N-acetilglukozaminës së lidhur me O (O-GlcNAc). Megjithatë, roli i fosforilimit të DELLA-s mbetet i paqartë, pasi studimet e mëparshme kanë treguar rezultate kontradiktore, duke filluar nga ato që tregojnë se fosforilimi promovon ose zvogëlon degradimin e DELLA-s deri te të tjerat që tregojnë se fosforilimi nuk ndikon në stabilitetin e tij. Këtu, ne identifikojmë vendet e fosforilimit në REPRESORI.ga1-3(RGA, AtDELLA) të pastruara nga Arabidopsis thaliana me anë të analizës së spektrometrisë së masës dhe tregojnë se fosforilimi i dy peptideve RGA në rajonet PolyS dhe PolyS/T nxit lidhjen H2A dhe rrit aktivitetin e RGA. Lidhja e RGA me promotorët e synuar. Veçanërisht, fosforilimi nuk ndikon në ndërveprimet RGA-TF ose në stabilitetin e RGA. Studimi ynë zbulon mekanizmin molekular me anë të të cilit fosforilimi shkakton aktivitetin DELLA.
Për të sqaruar rolin e fosforilimit në rregullimin e funksionit DELLA, është thelbësore të identifikohen vendet e fosforilimit të DELLA in vivo dhe të kryhen analiza funksionale në bimë. Me anë të pastrimit të afinitetit të ekstrakteve bimore të ndjekura nga analiza MS/MS, ne identifikuam disa fosfozite në RGA. Nën kushtet e mungesës së GA, fosforilimi i RHA rritet, por fosforilimi nuk ndikon në stabilitetin e tij. Është e rëndësishme të theksohet se analizat co-IP dhe ChIP-qPCR zbuluan se fosforilimi në rajonin PolyS/T të RGA nxit ndërveprimin e tij me H2A dhe lidhjen e tij me promotorët e synuar, duke zbuluar mekanizmin me të cilin fosforilimi shkakton funksionin e RGA.
RGA rekrutohet për të synuar kromatinën përmes ndërveprimit të nën-domenit LHR1 me TF dhe më pas lidhet me H2A përmes rajonit të saj PolyS/T dhe nën-domenit PFYRE, duke formuar kompleksin H2A-RGA-TF për të stabilizuar RGA. Fosforilimi i Pep 2 në rajonin PolyS/T midis domenit DELLA dhe domenit GRAS nga një kinazë e paidentifikuar rrit lidhjen RGA-H2A. Proteina mutante rgam2A eliminon fosforilimin e RGA dhe miraton një konformacion të ndryshëm të proteinës për të ndërhyrë në lidhjen H2A. Kjo rezulton në destabilizimin e ndërveprimeve kalimtare TF-rgam2A dhe shkëputjen e rgam2A nga kromatina e synuar. Kjo figurë përshkruan vetëm represionin transkriptues të ndërmjetësuar nga RGA. Një model i ngjashëm mund të përshkruhet për aktivizimin transkriptues të ndërmjetësuar nga RGA, përveç se kompleksi H2A-RGA-TF do të nxiste transkriptimin e gjenit të synuar dhe defosforilimi i rgam2A do të ulte transkriptimin. Figura e modifikuar nga Huang et al.21.
Të gjitha të dhënat sasiore u analizuan statistikisht duke përdorur Excel, dhe ndryshimet e rëndësishme u përcaktuan duke përdorur testin t të Studentit. Nuk u përdorën metoda statistikore për të përcaktuar paraprakisht madhësinë e mostrës. Asnjë e dhënë nuk u përjashtua nga analiza; eksperimenti nuk ishte i rastësishëm; studiuesit nuk ishin të verbër ndaj shpërndarjes së të dhënave gjatë eksperimentit dhe vlerësimit të rezultateve. Madhësia e mostrës tregohet në legjendën e figurës dhe në skedarin e të dhënave burimore.
Për më shumë informacion rreth dizajnit të studimit, shihni Abstraktin e Raportit të Portofolit Natyror që lidhet me këtë artikull.
Të dhënat e proteomikës së spektrometrisë masive i janë dhënë konsorciumit ProteomeXchange përmes depozitës partnere PRIDE66 me identifikuesin e të dhënave PXD046004. Të gjitha të dhënat e tjera të marra gjatë këtij studimi paraqiten në Informacionin Plotësues, Skedarët e të Dhënave Plotësuese dhe Skedarët e të Dhënave të Papërpunuara. Të dhënat burimore janë dhënë për këtë artikull.
Koha e postimit: 08 nëntor 2024