Materialet bimore dhe patogjene
Një popullatë hartografike e shoqatës së melekuqes e njohur si popullata e konvertimit të melekuqes (SCP) u sigurua nga Dr. Pat Brown në Universitetin e Illinois (tani në UC Davis).Është përshkruar më parë dhe është një koleksion linjash të ndryshme të konvertuara në pandjeshmëri ndaj periudhës së fotove dhe shtat më të vogël për të lehtësuar rritjen dhe zhvillimin e bimëve në mjediset amerikane.510 linja nga kjo popullatë u përdorën në këtë studim edhe pse për shkak të mbirjes së keqe dhe çështjeve të tjera të kontrollit të cilësisë, jo të gjitha linjat u përdorën në analizën e të tre tipareve.Në fund të fundit, të dhënat nga 345 linja u përdorën për analizën e përgjigjes së kitinës, 472 rreshta për përgjigjen flg22 dhe 456 për rezistencën TLS.B. cookeishtami LSLP18 u mor nga Dr. Burt Bluhm në Universitetin e Arkansas.
Matja e përgjigjes MAMP
Dy MAMP të ndryshme u përdorën në këtë studim flg22, (Genscript catalog# RP19986) dhe kitin.Bimët e melekuqe u rritën në inserte të vendosura në banesa të mbushura me tokë (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) në serë.Bimët u ujitën një ditë përpara mbledhjes së mostrës për të shmangur lagështinë shtesë të gjetheve në ditën e grumbullimit.
Linjat u randomizuan dhe, për arsye logjistike, u mbollën në tufa prej 60 linjash.Për çdo rresht u mbollën tre 'vazo' me dy fara për rresht.Tufat pasuese u mbollën sapo të përpunohej grupi i mëparshëm derisa të vlerësohej e gjithë popullata.Dy ekzekutime eksperimentale u kryen për të dy MAMP-të me gjenotipe të ri-randomizuar në secilën prej dy ekzekutimeve.
Analizat ROS u kryen siç u përshkrua më parë.Shkurtimisht, për çdo rresht u mbollën gjashtë fara në 3 vazo të ndryshme.Nga fidanët që rezultuan, tre u zgjodhën në bazë të uniformitetit.Fidanët që dukeshin të pazakontë ose ishin dukshëm më të gjatë ose më të shkurtër se shumica nuk u përdorën.Katër disqe gjethesh me diametër 3 mm u hoqën nga pjesa më e gjerë e gjethes së katërt të tre bimëve të ndryshme të melekuqes 15-ditore.Një disk për fletë nga dy bimë dhe dy disqe nga një bimë, me diskun e dytë që bëhet kontrolli i ujit (shih më poshtë).Disqet u vendosën individualisht në 50 µl H20 në një pjatë të zezë me 96 pusi, u mbyllën me një vulë alumini për të shmangur ekspozimin ndaj dritës dhe u mbajtën në temperaturën e dhomës gjatë natës.Të nesërmen në mëngjes u bë një zgjidhje reaksioni duke përdorur sondë kimilumineshente 2 mg/ml L-012 (Wako, katalogu # 120-04891), 2 mg/ml peroksidazë rrikë (Tipi VI-A, Sigma-Aldrich, katalogu # P6782) dhe 100 mg/ml Kitin ose 2 μM Flg22.50 µl të kësaj solucioni reaksioni u shtuan në tre nga katër pusetat.Pusi i katërt ishte një kontroll simulues, të cilit iu shtua zgjidhja e reaksionit duke përjashtuar MAMP.Katër puse bosh që përmbanin vetëm ujë u përfshinë gjithashtu në secilën pjatë.
Pas shtimit të tretësirës së reaksionit, luminescenca u mat duke përdorur lexuesin e mikropllakës me shumë zbulim SynergyTM 2 (BioTek) çdo 2 minuta për 1 orë.Lexuesi i pllakave merr matje të lumineshencës çdo 2 minuta gjatë këtij 1 ore.Shuma e të 31 leximeve u llogarit për të dhënë vlerën për çdo pus.Vlera e përllogaritur për përgjigjen MAMP për secilin gjenotip u llogarit si (vlera mesatare e lumineshencës së tre puseve eksperimentale - vlera e pusit tallës) -minus vlerën mesatare të pusit bosh.Vlerat e pusit të zbrazët ishin vazhdimisht afër zeros.
Disqet e gjetheve tëNicotiana benthamiana, një linjë melekuqe me reagim të lartë (SC0003) dhe një linjë melekuqe me reagim të ulët (PI 6069) u përfshinë gjithashtu si kontrolle në secilën pllakë 96 pusesh për qëllime të kontrollit të cilësisë.
B. cookeipërgatitja dhe inokulimi i inokulimit
B. cookeiinokulimi është përgatitur siç është përshkruar më parë.Shkurtimisht, kokrrat e melekuqe u zhytën në ujë për tre ditë, u shpëla, u futën në balona konike 1L dhe u autoklavuan për një orë në 15psi dhe 121 °C.Më pas kokrrat u inokuluan me rreth 5 ml miceli të maceruar nga një kulturë e freskët eB. cookeiLSLP18 izolohet dhe lihet për 2 javë në temperaturën e dhomës, duke tundur balonat çdo 3 ditë.Pas 2 javësh, kokrrat e melekuqes të infektuara nga kërpudhat u thanë në ajër dhe më pas u ruajtën në 4 °C deri në inokulimin e fushës.I njëjti inokulum u përdor për të gjithë provën dhe bëhej i freskët çdo vit.Për inokulim, 6-10 kokrra të infektuara u vendosën në vorbullën e bimëve melekuqe 4-5 javëshe.Sporet e prodhuara nga këto kërpudha filluan infeksionin në bimët e reja të melekuqes brenda një jave.
Përgatitja e farës
Para mbjelljes në fushë, fara e melekuqes është trajtuar me një përzierje fungicide, insekticide dhe mbrojtëse që përmban ~ 1% fungicid Spirato 480 FS, 4% fungicid Sebring 480 FS, 3% mbrojtës farash Sorpro 940 ES.Më pas farat u thanë në ajër për 3 ditë, gjë që siguroi një shtresë të hollë të kësaj përzierjeje rreth farave.Mbrojtësi lejoi përdorimin e herbicidit Dual Magnum si një trajtim para shfaqjes.
Vlerësimi i rezistencës së pikës së gjetheve të synuara
SCP u mboll në Stacionin Qendror të Kërkimit të Kulturave në Clayton, NC më 14–15 qershor 2017 dhe 20 qershor 2018 në një dizajn blloku të plotë të rastësishëm me dy përsëritje eksperimentale në secilin rast.Eksperimentet u mbollën në rreshta të vetme 1.8 m me gjerësi rreshti 0.9 m duke përdorur 10 fara për parcelë.Dy rreshta kufitarë u mbollën rreth periferisë së secilit eksperiment për të parandaluar efektet e skajit.Eksperimentet u inokuluan më 20 korrik 2017 dhe 20 korrik 2018 në të cilën pikë bimët e melekuqe ishin në fazën 3 të rritjes. Vlerësimet u morën në shkallët një deri në nëntë, ku bimët që nuk shfaqnin shenja sëmundjesh u vlerësuan si nëntë dhe plotësisht bimët e ngordhura u vlerësuan si një.Dy vlerësime u morën në 2017 dhe katër lexime në 2018 duke filluar dy javë pas vaksinimit çdo vit.sAUDPC (zona e standardizuar nën kurbën e përparimit të sëmundjes) u llogarit siç përshkruhet më parë.
Koha e postimit: Prill-01-2021